保存條件： 2-8℃冷藏 數(shù)量： 666 保質(zhì)期： 6 適應(yīng)物種： 多物種 用途范圍： 科研實(shí)驗(yàn) 產(chǎn)地： 上海 品牌： 科翰盛 規(guī)格： 48T 96T 樣本： 血清,血漿,尿液,組織等 檢測(cè)方法： 酶聯(lián)免疫 應(yīng)用： 科研 貨號(hào)： KHSJ18154



檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA） 。往預(yù)先包被植物果糖脫氧膽酸（DC）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脫氧膽酸（DC）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 （OD值） ,計(jì)算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法

1.樣本不能含疊氮鈉 （NaN3） ,因?yàn)榀B氮鈉 （NaN3） 是辣根化物酶 （HRP） 的劑。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請(qǐng)1000 xg離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。

4. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存

于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀 （450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在 2-8℃ ,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?，F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封 （低溫干燥） 保存。

3. 濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍,最終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度。

4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	12 孔×8 條	12 孔×4 條	無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品	0.3mL*6 管	0.3mL*6 管	無(wú)
樣本稀釋液	6mL	3mL	無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP	10mL	5mL	無(wú)
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物 A	6mL	3mL	無(wú)
底物 B	6mL	3mL	無(wú)
終止液	6mL	3mL	無(wú)
封板膜	2張	2 張	無(wú)
說(shuō)明書(shū)	1份	1份	無(wú)
自封袋	1個(gè)	1個(gè)	無(wú)

注:標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5） 濃度依次為:0,20,40,80,160,320 U/mL

試劑的準(zhǔn)備

20緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1. min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。

2.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液 350 μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

1. 從室溫平衡 20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50 μL;

3. 樣本孔先加待測(cè)樣本 10 μL,再加 40 μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶 （HRP） 標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100 μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次 （也可用洗板機(jī)洗板） 。

6.每孔加入底物 A、B 各 50 μL,37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50 μL,15min內(nèi),在 450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或?qū)嶒?yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R值,大于等于

0.9900。

2.靈敏度:檢測(cè)濃度小于 0.1 U/mL。

3. 特:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

5. 貯藏:2-8℃ ,避光防潮保存。