本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種用于化學(xué)成分結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確鑒定的多級(jí)在線能量分辨質(zhì)譜法(online ER2?MS)，其中第一個(gè)維度采用在線能量分辨質(zhì)譜法基于多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式構(gòu)建相關(guān)離子的裂解曲線，通過(guò)高斯曲線擬合，建立最佳碰撞能(OCE)與亞結(jié)構(gòu)連接方式的相關(guān)關(guān)系，第二個(gè)維度采用碰撞誘導(dǎo)解離后能量分辨質(zhì)譜法(post?CID ER?MS)基于三級(jí)質(zhì)譜(MS3)模式或三級(jí)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM3)模式構(gòu)建相關(guān)離子的裂解曲線，鑒定化學(xué)成分的亞結(jié)構(gòu)。與傳統(tǒng)化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定相比，online ER2?MS增加了質(zhì)譜的分析維度，鑒定亞結(jié)構(gòu)并提供亞結(jié)構(gòu)的連接信息，進(jìn)而在LC?MS分析平臺(tái)上，實(shí)現(xiàn)未知化合物結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確鑒定，具有高度的創(chuàng)新性和廣闊的應(yīng)用前景。