本發(fā)明涉及一種多功能交聯(lián)劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于有機(jī)合成技術(shù)領(lǐng)域。本交聯(lián)劑具有生物素富集單元，實(shí)現(xiàn)交聯(lián)肽高通量、高靈敏度分析；具有偶氮二苯基化學(xué)斷裂單元，實(shí)現(xiàn)交聯(lián)劑富集后的高效且溫和的釋放，提高質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定精準(zhǔn)度；具有琥珀酰亞胺酯結(jié)構(gòu)單元，生理?xiàng)l件下與蛋白質(zhì)、多肽賴氨酸殘基末端或N端氨基發(fā)生酰胺化反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的化學(xué)交聯(lián)；具有光活性基團(tuán)，實(shí)現(xiàn)真實(shí)的細(xì)胞原位蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及相互作用信息的解析。本發(fā)明交聯(lián)劑應(yīng)用于細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域，為實(shí)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)復(fù)合體的規(guī)?；治?、細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)的三維空間結(jié)構(gòu)解析、細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)相互作用解析提供重要的技術(shù)支撐。