本發(fā)明為基因重組的大腸桿菌及其在發(fā)酵制備蕓苔素內(nèi)酯上的應(yīng)用,解決了化學(xué)合成工藝復(fù)雜,環(huán)境污染大的問題。提取油菜植株各器官的總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)得到
CYP90B1、
CYP90C1、
CYP85A2三個(gè)基因的PCR產(chǎn)物,將PCR產(chǎn)物分別克隆到pGEM?Teasy載體,測序分析得到正確的基因序列。含目的基因的克隆載體經(jīng)相應(yīng)的內(nèi)切酶酶切后連接到表達(dá)載體pET?28a(+)上,測序分析得到三種重組的表達(dá)載體,三種重組表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)化同一目標(biāo)菌大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)篩選得到可以同時(shí)表達(dá)三個(gè)蛋白的大腸桿菌BL21(DE3)?BL。大腸桿菌BL21(DE3)?BL菌液接種到添加了底物麥角甾醇、甲羥戊酸和誘導(dǎo)物的發(fā)酵培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)發(fā)酵參數(shù),補(bǔ)料進(jìn)行連續(xù)發(fā)酵。發(fā)酵液用乙酸乙酯提取結(jié)晶或過層析柱制得蕓苔素內(nèi)酯。
聲明:
“基因重組的大腸桿菌及其在發(fā)酵制備蕓苔素內(nèi)酯中的應(yīng)用” 該技術(shù)專利(論文)所有權(quán)利歸屬于技術(shù)(論文)所有人。僅供學(xué)習(xí)研究,如用于商業(yè)用途,請聯(lián)系該技術(shù)所有人。
我是此專利(論文)的發(fā)明人(作者)