本發(fā)明公開了一種哺乳動物細胞表達啟動子及其制造和使用方法,該方法包括以下步驟:步驟一,通過化學合成的方式合成引物;步驟二,通過PCR反應(yīng),獲得啟動子序列;步驟三,通過限制性酶切位點:BglII?和Kpn1,上述啟動子序列插入包含有ori、卡納抗性基因、sv40、sv40?polyA、多酶切位點序列的質(zhì)粒骨架中,得到?pHep/L1質(zhì)粒;步驟四,轉(zhuǎn)染入E.Coli大腸桿菌進行質(zhì)粒擴增,提取質(zhì)粒,進行測序;步驟五,將新獲得的質(zhì)粒插入SEAP和IL10目的基因,通過CsCL密度梯度離心法提取純凈質(zhì)粒。本發(fā)明提高現(xiàn)有質(zhì)粒和AAV病毒的表達效率。
聲明:
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